间充质干细胞成软骨诱导分化试剂盒

本产品为精心优化的间充质干细胞成软骨诱导分化试剂盒，可增强间充质干细胞向成软骨细胞分化的能力。

本产品仅用于科研用途，不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途。

产品组成成分及保存

Ø 注意：

1.为保证产品的有效性，请避免反复冻融。

2.现用现配，配制好的预混液保存于2-8℃，有效期1 month;配制好的完全培养基保存于2-8℃，有效期12 hours.

产品使用说明

1. 成软骨诱导分化完全培养基的配制

①室温条件下融化各因子及血清。各因子融化后，瞬时离心，使溶液集中于离心管底部。

（注意：若因子或血清中有沉淀物，属正常现象，无须过滤，避免成分丢失。）

②根据实验用量，于无菌操作台中配制诱导分化完全培养基，建议每次配制50mL，配制比例见下表：

2. 成软骨诱导分化实验步骤

①建议取第3~5代、纯度达90%以上、状态良好的间充质干细胞，将其消化下来，离心收集，使用间充质干细胞完全培养基调整细胞密度为1~5×105个cell/mL，均匀铺于6孔板中，每孔2mL，置于37℃恒温细胞培养箱中培养。

（注意：此处细胞密度及培养液体积以6孔板为例，若为其它培养器皿，请根据实际情况调整细胞密度及培养液体积。）

②待细胞汇合度达80%~100%时，即可进行诱导分化。

③小心吸弃细胞培养上清，沿孔壁缓慢加入提前配制好的诱导分化完全培养基，每孔2mL，置于37℃恒温细胞培养箱中培养。

（注意：完全培养基加入细胞前需提前置于37℃预热。）

③每2day换用新鲜的诱导分化完全培养基。换液时，若细胞培养上清颜色变为澄清的黄色，是由于细胞量较大，培养基消耗较快导致的，请及时调整为每日换液。

（注意：完全培养基加入前需提前置于37℃预热。）

④细胞诱导3周后，即可进行甲苯胺蓝染色鉴定。

3. 甲苯胺蓝染色分析

①细胞诱导分化结束后，小心吸弃细胞培养上清，1×PBS润洗1~2次。每孔加入1mL细胞固定液（4%中性甲醛溶液等），室温固定30 min。

②吸弃细胞固定液，1×PBS润洗2次。沿孔壁缓慢加入甲苯胺蓝染色液，每孔1mL，室温染色30min。

（注意：染色液底部可能会有沉淀，吸取时尽量不要触及底部。若染色后有沉淀，1×PBS洗去即可。）

③吸出染色液，1×PBS润洗，去掉浮色。显微镜下观察细胞染色效果，背景呈淡蓝色，成软骨细胞呈紫红色。

（注意：染色液可重复使用，建议收集。）

质量控制

ü 无菌检测（细菌、真菌和支原体检测）

ü pH测试

ü 渗透压检测

ü 内毒素