鸡卵泡基膜细胞
一、产品简介
1. 产品名称:鸡卵泡基膜细胞
2. 组织来源:鸡卵泡组织
3. 产品规格:1×10⁶/T25细胞培养瓶
4. 细胞简介:
鸡卵泡基膜细胞分离自鸡卵泡组织;成熟卵泡是卵巢的组织结构成分之一,卵泡腔很大,卵丘很明显。卵泡内膜细胞紧靠卵泡颗粒层,与颗粒层细胞之间有一层基膜相隔,内膜细胞呈多边形,胞质清亮,胞核圆形,细胞间可见许多毛细血管,外膜细胞位于最外层,多呈梭形,与周围结缔组织分界不明显。
卵泡(follicle)中卵母细胞四周有一层菱形或扁平细胞围绕,在卵泡开始发育、卵细胞成长的同时,周围的菱形细胞变为立方形,并由单层增生成复层,因其细胞浆内含有颗粒,故称为颗粒细胞。
初级卵泡的颗粒细胞为单层;次级卵泡的颗粒细胞增至复层;成熟卵泡的颗粒细胞展开又变为单层。颗粒细胞的胞核大而圆,着色深,细胞的游离面有许多细长突起伸入放射带的凹陷部。
5. 方法简介:
实验室分离的鸡卵泡基膜细胞采用先机械分离后胶原酶反复消化法、并通过专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为1×10⁶/瓶。
6. 质量检测:
实验室分离的鸡卵泡基膜细胞经3β-HSD免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
7. 培养信息:
培养基: 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 成纤维细胞样
传代特性: 可传2-3代
传代比例: 1:2
消化液: 0.25%胰蛋白酶
培养条件: 气相:空气,95%;CO2,5%
鸡卵泡基膜细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
二、使用方法
鸡卵泡基膜细胞是一种贴壁细胞,细胞形态呈成纤维细胞样,在德尔夫技术部标准操作流程下,细胞可传2-3代;建议您收到细胞后尽快进行相关实验。客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化;
3)用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和技术部沟通;由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
5. 该细胞只可用于科研。
6. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
7. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。