MDA-MB-436 人乳腺癌细胞

细胞描述

该细胞源于一名43岁患有乳腺腺癌女性的胸腔积液，细胞呈多形性，大多数细胞在间接免疫荧光染色时呈现与抗微管抗体的强烈反应。

细胞特性

1） 来源：人，女性，乳腺腺癌胸水转移灶

2） 形态：有多核成分的多形细胞，贴壁生长

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5） 用途：仅供科研使用。

运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞

（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理：

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。 

一．培养基及培养冻存条件准备：

1) 准备L15 基础培养基                                             89%

     优质胎牛血清                                                       10%

     P/S青霉素-链霉素                                               1%

     谷胱甘肽（还原型）                                            16ug/ml

      胰岛素                                                                0.01mg/ml

2)注意事项：

a． 该细胞不能用胰酶消化，传代时，使用细胞刮铲轻轻把细胞刮下来。抽出细胞液离心后传到新的培养瓶中。

b． L-15培养基配方设计用于与大气进行自由气体交换。使用该培养基进行培养时应使用空气100%。CO 2和空气混合物对细胞有害。如果没有条件准备空气气相100%的培养箱的，可以采用不透气密封盖的T25培养瓶来培养，培养过程中每天将细胞拿出培养箱换1-2次空气。

3) 培养条件： 气相：空气，100%； 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

4) 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1）冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达70%-90%，即可进行传代培养。

可以通过将贴壁细胞用细胞刮铲刮入含有漂浮细胞的培养基中，通过离心收集细胞，将细胞沉淀重悬于新鲜培养基中并分配到新的培养瓶中来对细胞进行传代。建议收货后的第一次传代密度为1:2进行。后续的传代可根据实际情况按1:2~1:4的比例进行。

3） 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

下面T25瓶为例；

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程（使用细胞刮铲收取细胞）收集细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.

2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。