hESC-h9 人胚胎干细胞

产品描述

种属: 人源（Homo sapiens）

组织来源: 未知（Unknown）

疾病: 未知（Unknown）

年龄: 未知（Unknown）

性别: 未知（Unknown）

生长特性: 贴壁生长（Adherent）

拆包 & 存储

1. 请立即检查包装袋是否有破损或漏液

2. 请立即将细胞培养瓶从包装盒中取出，并按照下方操作步骤进行培养传代

注意：如为冻存管，请收到后立即解冻培养。若来不及解冻，请储存于液氮中（存储于负80度，会降低细胞存活率）

细胞操作步骤

一、 铺板

1. 提前一天在4℃冰箱中解冻干细胞铺底工作液添加剂。

2. 用预冷的移液管将铺底工作液添加剂和铺底工作液基础液按照1:9的比例混匀。

3. 将铺底工作液覆盖瓶底（6孔板1mL，依次类推），置于37℃培养箱过夜。

4. 使用前，用PBS洗涤一次。

注意：可根据试剂用量将铺底工作液添加剂分装保存-80℃，避免反复冻融。

二、 细胞复苏

1. 首先开启复苏添加剂小瓶上的铝盖，并用酒精棉擦拭其表面，使用注射器吸取5mL复苏基础培养基加入到瓶中，颠倒混匀。

2. 将复苏添加剂和复苏基础液按照0.5mL：10mL的比例混匀，配置后的复苏完全培养基保存4℃（可保存2周，可根据试剂用量将添加剂分装保存于-80℃，避免反复冻融）。

3. 37℃水浴中，迅速解冻细胞，用酒精棉擦拭，转移至无菌操作台中。

4. 将细胞悬浮液转移至含有5mL复苏完全培养基的15mL离心管中200g离心5min。

5.弃上清，加入适量复苏完全培养基，轻柔重悬细胞，接种到包被好的培养瓶中。

6. 水平十字摇匀，室温放置15min.显微镜下观察大部分细胞贴壁后，放入5%CO₂ 的37℃培养箱中。

7. 培养24h后，弃掉复苏完全培养基，加入新鲜的干细胞完全培养基（配置见下）

三、细胞传代

1. 首先开启干细胞培养基添加剂小瓶上的铝盖，并用酒精棉擦拭其表面，使用注射器吸取5mL干细胞基础培养基加入到瓶中，颠倒混匀。（注意：可根据试剂用量将添加剂分装保存于-80℃，避免反复冻融。）

2.将干细胞培养基添加剂和干细胞基础液按照1mL：100mL的比例混匀，配置后的复苏完全培养基保存4℃（可保存2周）。

3. 将完全培养基平衡至室温，取出包被过的培养皿，吸走包被液并加入适量完全培养基，置于37℃培养箱中预热。

5. 吸走细胞中上清并加入无钙镁PBS洗涤一次，加入适量干细胞消化液，37℃孵育4-6min,显微镜下大部分克隆边缘开始脱落，克隆内细胞间隙明显则可。

6. 吸去消化液，加入完全培养基，轻柔吹细胞，转移到新培养板中。

7.水平十字摇匀，室温放置15min.显微镜下观察大部分细胞贴壁后，放入5%CO₂ 的37℃培养箱中。

传代比例：建议 1:3 至 1:4

培养基换液: 每天换液。

完全培养基配制

该细胞系培养所用基本培养基为干细胞专用培养基。

使用范围

本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。