CHO-S 仓鼠卵巢细胞

细胞介绍
贴壁生长及悬浮生长均可（用于蛋白表达时，应使用悬浮生长状态，此时细胞生长状态更好，比表面积更高，生物反应器中的传质、传热效率更高，同时也可提高生物反应器空间使用效率。工业上大规模生产单抗，重组蛋白，大部分使用悬浮培养法来生产）

细胞特性
1）来源：中国仓鼠
2）形态：成纤维细胞样
3）含量：>1×10⁶ 个/mL
4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

运输和保存

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式

（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；

（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。

（3）具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供科研使用。
                       
细胞培养步骤
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）培养基信息：EX-CELL CD-CHO CHO Serum-free Medium,Chemically Defined
添加物：
L-谷氨酰胺（Sigma-Aldrich）
Anti-Clumping Agent
备注：CD-CHO CHO Serum-free Medium请按照培养基配制说明书配制，L-谷氨酰胺配制浓度为200mM，工作浓度为8mM（即稀释25倍，如500ml CHO Serum-free Medium 中添加20ml 200mM L-谷氨酰胺，抗结团剂使用为1%，即500ml CHO Serum-free Medium 中添加5ml 抗结团剂）
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
传代、转染、建库及实验室规模小试方法：
德尔夫提供的CHO-S细胞为已驯化的细胞，具有良好的适应悬浮生长及适应无血清培养基生长特性。
传代方法：
1.10cm皿中培养：使用计数器（计数器或者血球计数板计数）计数，接种密度为3×105个细胞/ml接种于提前37℃预热的新鲜培养基中（建议培养基取7-8ml，此时细胞生长状态较好），置于摇床上生长，转速为120-130rpm，湿度为70-80%，5%二氧化碳，温度为37℃。
2.培养约2-3天，细胞密度达到1×10⁶个活细胞/ml时，应1000rpm，25℃离心5min，离心后计数（此时应稀释），然后接种密度为3×105个细胞/ml接种于提前37℃预热的新鲜培养基中。细胞数目足够时，可冻存。
也可选择125ml或者250ml摇瓶中培养细胞。（注意细胞培养液体积一般在总体积的五分之一，如在125ml摇瓶中加入25ml培养物，应注意在摇瓶中培养细胞时应将瓶盖稍微拧松，以便于气体交换，同时也不宜拧得过松，防止细胞污染）
转染方法：
在连续5代细胞密度未超过2×10⁶个活细胞/ml时，可以使用FreeStyle Max转染试剂（Gibco）在CD CHO Serum-free Medium中直接转染。（注意：Anti-Clumping Agent会干扰FreeStyle Max转染试剂转染效率，同时也会干扰其他脂质体型转染试剂的转染效率）
建库方法：
若需要建库，可将细胞接种于125ml摇瓶中（接种密度为3×105个细胞/ml，总体积为25ml），此方法同样适用于稳定表达所需要蛋白的细胞株的建库工作。建库时，需要先建初级库（master bank）（一般为10支，每支细胞总数不少于4.5×10^7个细胞），此步骤结束后，从冻存的初级库中取出一支复苏，按照同样步骤建次级库（working bank）（相同的，一般为10支，每支细胞总数不少于4.5×10^7个细胞）。
实验室规模小试方法：
将挑选出的稳定细胞株从96孔板到24孔板到6孔板到10cm皿中逐级扩大培养后（此时需要注意在培养过程中应及时保种，以防止后续步骤出现污染，及应对可能的表达量衰退现象）以3×105个细胞/ml接种于125ml摇瓶中，转速为120-130rpm，温度为37℃，湿度为70-80%，连续培养一周，每天取样做出相应的细胞生长曲线，细胞活率曲线，蛋白表达曲线，可根据实际情况，每天取样测出培养基中葡萄糖含量，以便决定是否需要补加葡萄糖，同时可使用CHO Feed Bioreactor Supplement作为细胞发酵中补料，同时做出相应的细胞生长曲线，细胞活率曲线，蛋白表达曲线，为中试放大补料添加做出合理数据支持。